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黑曲霉果胶裂解酶基因在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中的表达
毕赤酵母
化学
重组DNA
生物化学
基因
作者
强慧妮,
杨欣伟,
田宝玉,
柯崇榕,
林伟铃,
吕睿瑞,
黄薇,
王春香,
黄建忠
出处
期刊：生物工程学报
日期：2009-01-01
卷期号： (12): 1962-1968
链接
cqvip.com
摘要
利用RT-PCR技术从黑曲霉（EIM-6）中扩增得到去除信号肽的果胶裂解酶基因A,将其插入到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,构建重组表达质粒pPIC9K-pelA,电击转化毕赤酵母GS115,得到了表达成功的工程菌株。用终浓度为1.5%的甲醇对其进行诱导,将发酵上清液浓缩后,用盐酸法测定其酶活可以达到2.3U/mL。通过对重组毕赤酵母诱导表达产物进行SDS-PAGE鉴定,发现重组毕赤酵母分泌了1个约38kD的蛋白,与该酶基因产物的理论值相符,并通过水解圈法测定验证,均说明果胶裂解酶得到正确的分泌表达.
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