Fluoro-Jade B染色与蛋白免疫荧光多标的染色方法

目的：寻找一种Fluoro-Jade B（FJB）染色结合目的蛋白免疫荧光多标的合适方法。方法通过电凝法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型（MCAO），诱导皮层缺血半暗带神经元变性。实验分为FJB染色结合蛋白免疫荧光组以及目的蛋白免疫荧光结合FJB染色组。大鼠MCAO后5 d断头取脑，脑组织冰冻切片后，按上述两种染色顺序染色，观察两组实验双标的效果。结果 FJB染色结合目的蛋白免疫荧光组中，FJB和蛋白免疫荧光阳性细胞形态清楚，免疫双标效果良好；而蛋白免疫荧光结合FJB染色组，虽然FJB阳性细胞较为清晰，但与之免疫双标的蛋白免疫荧光阳性细胞不清楚，背景模糊，效果不佳。结论在两种免疫双标的方法中，先行FJB染色后再做目的蛋白免疫荧光染色，不会影响蛋白免疫荧光的染色效果，有利于后续实验的进行和观察。