Effect of astilbin on inhibition of phosphatidy linositol 3-kinase-protein kinase B(PI-3K-PKB)in alloreactive T cells of mouse heart transplantation model with acute rejection

目的 探讨落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/PKB)信号传导通路的影响.方法 分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105 /ml)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106/ml),前者作刺激细胞,后者作反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型.实验分4组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;3个实验组在对照组基础上,落新妇甙组加入落新妇甙(15 μg/ml);落新妇甙加PI3K激动剂组加入落新妇甙(15 μg/ml)和PI3K激动剂IL-8(20μg/ml);落新妇甙加PI3K抑制剂组加入落新妇甙(15 μg/ml)和PI3K抑制剂LY294002(20 μmol/L).TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况.Western blot法检测T细胞PI3K和Bcl-2蛋白表达情况.RT-PCR法检测T细胞PKB mRNA表达情况.结果 落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组[(74.2±11.7)%对(34.2±9.6)%,P＜0.01],PI3K、PKB、Bcl-2表达显著低于对照组(P＜0.01).落新妇甙加PI3K抑制剂组T细胞凋亡指数显著高于落新妇甙组,PI3K、PKB、Bcl-2显著低于落新妇甙组(P＜0.01).落新妇甙加PI3K激动剂组T细胞凋亡指数和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 落新妇甙诱导心脏移植效应性T细胞凋亡与其抑制PI-3K/PKB信号通路有关。