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Improving the expression yield of recombinant adeno‐associated virus serotype 2 using dimethyl sulfoxide DMSO as an additive to the triple transient transfection process of HEK293 cells

转染 HEK 293细胞 分子生物学 衣壳 细胞培养 重组DNA 二甲基亚砜 腺相关病毒 生物 化学 病毒 病毒学 生物化学 基因 载体(分子生物学) 遗传学 有机化学
作者
Alan J. Burns,Daniel Ramos‐Sono,Saurav Datta
出处
期刊:Biotechnology Progress [Wiley]
标识
DOI:10.1002/btpr.70017
摘要

Abstract One of the widely used techniques for producing recombinant adeno‐associated virus serotype 2 (rAAV2) particles, as viral vectors for gene therapy applications, is the triple transient (TT) transfection of human embryonic kidney 293 (HEK293) cells. It is desirable to optimize this transfection process for more efficient manufacturing of rAAV viral vectors for gene therapy purposes. We examined the application of dimethyl sulfoxide (DMSO) as an additive to this transfection technique to improve the expression yield of rAAV2 particles with HEK293 cells in adherent and suspension cell culture modalities. This assistance by DMSO should increase the trafficking of plasmid DNA (pDNA) through the cell membrane, and thus, increase the viral titer of rAAV2 full capsids at the time of harvesting the cell culture. The study demonstrated that DMSO as an additive for the TT transfection process led to an 8.2‐fold increase in the expression yield of full AAV2 capsids using HEK293 cells in adherent cell culture modality, and also led to a 4.0‐fold increase in the expression yield of full AAV2 capsids using HEK293 cells in suspension cell culture modality. There are no reported studies on the application of DMSO as an additive to the TT transfection process of HEK293 cells for the production of AAV particles. This is a novel, simple, and inexpensive method to improve the yield of rAAV2 full capsids with the TT transfection process of HEK293 cells, using a well‐known cryoprotectant agent (CPA), as an additive to this transfection process.

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