Incorporating Pericytes into an Endothelial Cell Bead Sprouting Assay

血管生成 萌芽血管生成 细胞生物学 生物 壁细胞 内皮干细胞 伤口愈合 基因沉默 新生血管 体外 癌症研究 免疫学 遗传学 基因
作者
Salma H. Azam,Mitchell Smith,Vivek Somasundaram,Chad V. Pecot
出处
期刊:Journal of Visualized Experiments [MyJoVE Corporation]
卷期号: (132) 被引量:4
标识
DOI:10.3791/57309
摘要

Angiogenesis is the growth of new vessels from pre-existing vasculature and is an important component of many biological processes, including embryogenesis and development, wound healing, tumor growth and metastasis, and ocular and cardiovascular diseases. Effective in vitro models that recapitulate the biology of angiogenesis are needed to appropriately study this process and identify mechanisms of regulation that can be ultimately targeted for novel therapeutic strategies. The bead angiogenesis assay has been previously demonstrated to recapitulate the multiple stages of endothelial sprouting in vitro. However, a limitation of this assay is a lack of endothelial – mural cell interactions, which are key to the molecular and phenotypic regulation of endothelial cell function in vivo. The protocol given here presents a methodology for the incorporation of mural cells into the bead angiogenesis assay and demonstrates a tight association of endothelial cells and pericytes during sprouting in vitro. The protocol also details a methodology for effective silencing of target genes using siRNA in endothelial cells for mechanistic studies. Altogether, this protocol provides an in vitro assay that more appropriately models the diverse cell types involved in sprouting angiogenesis, and provides a more physiologically-relevant platform for therapeutic assessment and novel discovery of mechanisms of angiogenesis regulation.

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