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Oligonucleotide Inhibitors ofTaqDNA Polymerase Facilitate Detection of Low Copy Number Targets by PCR

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作者
Chinh Dang,Sumedha D. Jayasena
出处
期刊:Journal of Molecular Biology [Elsevier]
卷期号:264 (2): 268-278 被引量:104
标识
DOI:10.1006/jmbi.1996.0640
摘要

A random sequence library of single stranded DNA was screened to isolate sequences with high affinity for Thermus aquaticus DNA polymerase (Taq pol), a thermostable enzyme commonly used in the polymerase chain reaction (PCR). Selected oligonucleotide sequences bound Taq pol with dissociation constants in the low picomolar range, and efficiently inhibited polymerase activity at room temperature (20 to 25 degrees C), but did not inhibit at temperatures above 40 degrees C. Moreover, inhibition was thermally reversible. A process called "hot start" PCR is commonly used to prevent non-specific PCR products in amplification of low copy number targets. We show that the addition of oligonucleotide inhibitors eliminated the need for "hot start" conditions and improved the efficiency of detection of a low copy number target in PCR.
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