抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1质控方法的建立

目的：建立抗体偶联药物（ADC）抗人表皮生长因子受体-2（HER2）单抗-马来酰亚胺基-环己烷-1-羧化物（MCC）-美登素衍生物（DMl）（trastuzumab-DMl，T-DMl）的质控方法。方法：利用人乳腺癌BT-474细胞增殖抑制实验测定T-DMl的生物学活性；利用生物分子间相互作用分析核心技术（biomolecular interaction analysis core-technology，BIAcore）测定其结合常数（‰）；利用HER2抗原和抗DMl抗体双夹心酶联免疫法（ELISA）对T-DMl进行鉴别；利用液质联用法和紫外分光光度法测定药物抗体偶联比（DAR）；利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定游离药物DMl的含量；利用十二烷基磺酸钠-毛细管凝胶电泳（capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate，CE-SDS）和分子排阻色谱（sizeexclusion-high performance liquid chromatography，SE-HPLC）分析纯度；利用成像毛细管等点聚焦电泳（iCIEF）分析电荷异质性，其他各项指标均符合现行版中国药典的要求及其他相关要求。结果：T-DMl生物学活性相对效价为（94．04±2．60）％，Ks为（1．03±0．02）E-9mol·L^-1，RSD均小于5％；ELISA鉴别为阳性；液质联用法和紫外分光光度法测得的DAR分别为3．2l及3．25；RP-HPLC法测定游离药物DMl的含量为（0．8222±0．0505）％，RSD小于10％；非还原CE-SDS主峰面积为（96．63±0．07）％，RSD为0．07％；SE-HPLC主峰面积为（97．65±0．0058）％，RSD为0．0058％；iCIEF分析可以将每个偶联数的抗体药物分开，达到很好的鉴别。结论：建立ADC中T-DMl质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点，为我国ADC的质量检测提供了参考依据。