Purification and Subfractionation of Mitochondria from the Yeast Saccharomyces cerevisiae

线粒体 内膜转移酶 生物 细胞器 细菌外膜 线粒体载体 外膜转位酶 内膜 膜间隙 线粒体膜转运蛋白 酵母 细胞生物学 酿酒酵母 线粒体内膜 生物化学 大肠杆菌 基因
作者
István Boldogh,Liza A. Pon
出处
期刊:Methods in Cell Biology [Elsevier BV]
卷期号:: 45-64 被引量:45
标识
DOI:10.1016/s0091-679x(06)80002-6
摘要

This chapter focuses on the well-established protocols for isolating yeast mitochondria, purifying the organelle using Nycodenz gradients, determining the integrity of isolated mitochondria, and fractionating mitochondria into their sub-compartments. It discusses several protocols for isolation of mitochondria such as growth of yeast cells, isolation of crude mitochondria, and purification of crude mitochondria using continuous Nycodenz gradient centrifugation. It describes how these methods may be used to determine whether a protein localizes to mitochondria and to sub-compartments (outer membrane, inner membrane, inter-membrane space, and matrix) within the organelle. Isolated mitochondria can be fractionated further into inner and outer membranes, as well as contact sites, which are sites of close contact between the outer and inner membranes that are implicated as sites for translocation of protein and phospholipids across, and between, the mitochondrial outer and inner membranes. Isolated mitochondria are routinely used to study activities of resident mitochondrial proteins and determine whether a protein localizes to mitochondria. For both applications, it is critical to document the purity and integrity of the mitochondrial preparation. The simplest way to do so is to perform SDS-PAGE and Western blot analysis, using antibodies raised against proteins of different membrane organelles. The chapter also describes the methods to determine the disposition of proteins on mitochondrial membranes.

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
更新
PDF的下载单位、IP信息已删除 (2025-6-4)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
可可西里完成签到,获得积分10
刚刚
函王完成签到,获得积分10
2秒前
2秒前
3秒前
4秒前
白斯特发布了新的文献求助10
4秒前
5秒前
5秒前
wxs发布了新的文献求助10
5秒前
CR7完成签到,获得积分10
7秒前
桐桐应助pipi采纳,获得10
7秒前
David发布了新的文献求助10
7秒前
8秒前
galvin完成签到,获得积分10
9秒前
旧城以西发布了新的文献求助10
9秒前
芽芽配茄子完成签到 ,获得积分10
9秒前
量子星尘发布了新的文献求助30
9秒前
田様应助悦耳的尔冬采纳,获得10
10秒前
10秒前
草莓大王完成签到,获得积分10
11秒前
哈哈哈完成签到,获得积分10
11秒前
11秒前
11秒前
可乐发布了新的文献求助10
11秒前
姚景涛完成签到,获得积分10
11秒前
你说的完成签到 ,获得积分10
12秒前
13秒前
15秒前
15秒前
16秒前
Sor完成签到,获得积分10
17秒前
凌儿响叮当完成签到 ,获得积分10
17秒前
18秒前
19秒前
Sor发布了新的文献求助10
19秒前
Qizhang发布了新的文献求助10
20秒前
qiyun发布了新的文献求助10
21秒前
在水一方应助文艺的白翠采纳,获得10
21秒前
呼呼呼完成签到,获得积分10
22秒前
xkw发布了新的文献求助10
23秒前
高分求助中
A new approach to the extrapolation of accelerated life test data 1000
Cognitive Neuroscience: The Biology of the Mind 1000
Technical Brochure TB 814: LPIT applications in HV gas insulated switchgear 1000
ACSM’s Guidelines for Exercise Testing and Prescription, 12th edition 500
Picture Books with Same-sex Parented Families: Unintentional Censorship 500
Nucleophilic substitution in azasydnone-modified dinitroanisoles 500
不知道标题是什么 500
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 生物化学 物理 内科学 纳米技术 计算机科学 化学工程 复合材料 遗传学 基因 物理化学 催化作用 冶金 细胞生物学 免疫学
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3970048
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3514739
关于积分的说明 11175783
捐赠科研通 3250115
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1795198
邀请新用户注册赠送积分活动 875630
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 804951