High-level secretory expression and purification of unhydroxylated human collagen α1(III) chain inPichia pastorisGS115

毕赤酵母 重组DNA 酵母 互补DNA 化学 分子生物学 十二烷基硫酸钠 毕赤酵母 表达式向量 分泌蛋白 污渍 生物化学 色谱法 生物 聚丙烯酰胺凝胶电泳 分泌物 基因
作者
Linbo Li,Daidi Fan,Xiaoxuan Ma,Jianjun Deng,Jing He
出处
期刊:Biotechnology and Applied Biochemistry [Wiley]
卷期号:62 (4): 467-475 被引量:21
标识
DOI:10.1002/bab.1297
摘要

Abstract Recombinant collagen and gelatin have been applied in biomedical materials field because of products from genetically engineered microorganisms with improved safety, traceability, reproducibility, and homogeneous quality. To obtain high‐level secretory expression of single‐chain full‐length human collagen α1(III) chain (COL3A1) without the N and C telopeptides, the cDNA coding for the human COL3A1 gene was cloned into the secretory expression vector pPIC9K and integrated into Pichia pastoris GS115. Sodium dodecyl sulfate‐polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting analysis of culture supernatant from the recombinant methylotrophic yeast suggested that the unhydroxylated recombinant human COL3A1 (rhCOL3A1) was secreted into the culture medium, and exhibited an apparent molecular mass of approximately 130 kDa, which is 1.4 times higher than the theoretical one. Finally, the unhydroxylated rhCOL3A1 was purified to greater than 90% purity using a four‐step approach. In addition, methylthiazolydiphenyl‐tetrazolium bromide experiments indicated that low concentration of rhCOL3A1 could promote Baby hamster kidney cell (BHK21) proliferation effectively. The production and purification of rhCOL3A1 described in this study offer a new method for obtaining high level of rhCOL3A1 in relatively pure form, which is suitable for biomedical materials application.
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