Simplified Purification of AAV and Delivery to the Pancreas by Intraductal Administration

Cre重组酶 绿色荧光蛋白 转基因 胰腺 基因传递 Cre-Lox重组 生物 细胞生物学 基因 病毒载体 腺相关病毒 遗传增强 重组酶 分子生物学 载体(分子生物学) 计算生物学 转基因小鼠 遗传学 重组DNA 生物化学 重组
作者
Ping Guo,John Wiersch,Xiangwei Xiao,George K. Gittes
出处
期刊:Methods in molecular biology 卷期号:: 373-387 被引量:13
标识
DOI:10.1007/978-1-4939-9139-6_22
摘要

Genetic manipulation is a very powerful tool for studying diabetes, pancreatitis, and pancreatic cancer. Here we discuss the use of an adeno-associated virus (AAV) vector to modify gene expression, such as to introduce a green fluorescence protein (GFP) in wild-type mice, cre recombinase in loxP mice, or to inactivate a gene with shRNA. The use of viruses for genetic modification allows for time-specific genetic changes which have advantages over time-consuming and often complex cross-breeding strategies. Here we provide a detailed approach for this process from viral production and purification through pancreatic ductal infusion. Our protocol allows efficient delivery of AAV to mediate GFP or cre expression for cell lineage tracing in the mouse pancreas or for the delivery of transgenes under a specific promoter to these cells.
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