PCR电泳挂带,胶图很奇怪,有没有大佬帮我分析下

综合讨论 5598 2 1
白衣如初
白衣如初 发表于:2022-03-03 18:10:41

PCR电泳跑的胶图,出现这种挂孔,条带很奇怪,电泳液更换过了,能换的都换新的了,marker没有问题,排出胶的问题,中间更换了一次loading条带正常了,但是不久又出现了这种问题 ,loading别人用就没有问题。


本帖完毕
回帖
  • 肥皂剧
    椅子
    肥皂剧 2022-03-27 19:53:37
    排除过核酸染料的问题了吗
  • 茶艺大师づ
    沙发
    茶艺大师づ 2022-03-07 16:01:17
    除了拖尾,你的目的带位置应该正确吧,那么PCR结果还不是太郁闷啊!关键是去掉非特异扩增。有以下几个建议供参考:
    1.此次电泳明显上样量太多,可适当减少,易于观察。
    2.你上样时一个泳道换一个枪头还是用一个枪头,如果是后者,尽量多吹吸几次,感觉好像有污染(不一定是)。
    3.每个PCR体系中有蛋白污染的可能吗?因为有的泳道好像有东西没跑下来,由于蛋白和核酸的作用力可导致拖带。
    4.PCR的退火温度适当可以提高一些以减少引物和模板的非特异结合。
    5.减少PCR体系的模板量。
    6.用热启动PCR试试。
    7.体系中加些减少非特异结合的试剂。我们实验室用的是胶体金,效果很好。
    另外,那个DMSO主要是阻止核酸形成二级结构的,如发卡等,如果PCR产物目的带前面距离很近的位置有较强的带,有可能是模板二级结构的影响,加DMSO可能消除,但我们做过,效果不是很好,目的带和其前面的带都变弱了,怀疑其抑制了酶的活性,反而加甜菜碱(作用同DMSO)的效果好。不过,看楼主的PCR产物这个问题可以先不考虑:)
    祝你好运!
更新
大幅提高文件上传限制,最高150M (2024-4-1)

科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
刚刚
酷炫的电源完成签到 ,获得积分10
刚刚
1秒前
笨笨豌豆完成签到 ,获得积分10
1秒前
机智的皮皮虾完成签到,获得积分10
1秒前
双双完成签到 ,获得积分10
2秒前
喵喵完成签到,获得积分10
2秒前
思源应助久违采纳,获得10
2秒前
ssm发布了新的文献求助10
2秒前
典雅灭龙完成签到,获得积分10
4秒前
缓慢谷雪完成签到,获得积分20
4秒前
5秒前
6秒前
7秒前
7秒前
landewen完成签到 ,获得积分10
7秒前
ddd发布了新的文献求助10
7秒前
材料若饥完成签到,获得积分10
8秒前
8秒前
ok完成签到,获得积分10
9秒前
yao发布了新的文献求助10
10秒前
久违完成签到,获得积分10
10秒前
iuv发布了新的文献求助10
10秒前
静越完成签到 ,获得积分10
11秒前
12秒前
13秒前
jajjjjaa发布了新的文献求助10
13秒前
呢呢发布了新的文献求助10
13秒前
13秒前
14秒前
缓慢谷雪发布了新的文献求助10
14秒前
14秒前
香蕉觅云应助io采纳,获得10
17秒前
马马马发布了新的文献求助10
17秒前
mm发布了新的文献求助10
17秒前
大模型应助呢呢采纳,获得10
18秒前
eden完成签到,获得积分10
18秒前
19秒前
zzz发布了新的文献求助10
19秒前
北斋发布了新的文献求助30
20秒前
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3137260
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 2788392
关于积分的说明 7785921
捐赠科研通 2444458
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1299916
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 625650
版权声明 601023
最新评论
很不错 4小时前
非常有用 16小时前
60%乙醇 16小时前
这个网站真的好方便,有求必应,速度极快,文献下载再也不愁了,推荐大家收藏使用。 17小时前
这篇论文里有中文版图片:基于二维半导体材料光电器件的研究进展。知网可以下到。 原版图片的话,是这篇:Progress, Challenges, and Opportunities for 2D material based photodetectors 19小时前
找不到的文献都能在这里找到 20小时前
下载文献很方便 1天前
特别适合科研人 科研人的好帮手 1天前