PCR电泳跑的胶图,出现这种挂孔,条带很奇怪,电泳液更换过了,能换的都换新的了,marker没有问题,排出胶的问题,中间更换了一次loading条带正常了,但是不久又出现了这种问题 ,loading别人用就没有问题。
1.此次电泳明显上样量太多,可适当减少,易于观察。
2.你上样时一个泳道换一个枪头还是用一个枪头,如果是后者,尽量多吹吸几次,感觉好像有污染(不一定是)。
3.每个PCR体系中有蛋白污染的可能吗?因为有的泳道好像有东西没跑下来,由于蛋白和核酸的作用力可导致拖带。
4.PCR的退火温度适当可以提高一些以减少引物和模板的非特异结合。
5.减少PCR体系的模板量。
6.用热启动PCR试试。
7.体系中加些减少非特异结合的试剂。我们实验室用的是胶体金,效果很好。
另外,那个DMSO主要是阻止核酸形成二级结构的,如发卡等,如果PCR产物目的带前面距离很近的位置有较强的带,有可能是模板二级结构的影响,加DMSO可能消除,但我们做过,效果不是很好,目的带和其前面的带都变弱了,怀疑其抑制了酶的活性,反而加甜菜碱(作用同DMSO)的效果好。不过,看楼主的PCR产物这个问题可以先不考虑:)
祝你好运!