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Enzymatic Amplification of DNA by PCR: Standard Procedures and Optimization

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作者
Martha F. Kramer,Donald M. Coen
出处
期刊:Current protocols in molecular biology [Wiley]
卷期号:56 (1) 被引量:148
标识
DOI:10.1002/0471142727.mb1501s56
摘要

This unit describes a method for amplifying DNA enzymatically by the polymerase chain reaction (PCR), including procedures to quickly determine conditions for successful amplification of the sequence and primer sets of interest, and to optimize for specificity, sensitivity, and yield. The first step of PCR simply entails mixing template DNA, two appropriate oligonucleotide primers, Taq or other thermostable DNA polymerases, deoxyribonucleoside triphosphates (dNTPs), and a buffer. Once assembled, the mixture is cycled many times (usually 30) through temperatures that permit denaturation, annealing, and synthesis to exponentially amplify a product of specific size and sequence. The PCR products are then displayed on an appropriate gel and examined for yield and specificity. Recommended optimization conditions are included.
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